Yumurta Toplama ve Hazırlama
|
Hazırlık: GM501 MediaLine serisinden aşağıdaki ürünleri hazırlayınız.
|
● GM501 Flush ● GM501 Wash ●GM501 Hyaluronidase ● GM501 Mineral Oil
Yumurta Toplama:
GM501 Flush için CO2 dengelenmesi gerekli değildir sadece 37°C ısıtılması yeterlidir.
GM501 Flush hariç diğerleri 37°C de % 4 - 6 CO2 li ortamda en az 4 saat dengelenmelidir. İşlemde kullanılacak olan bütün gereçleri GM501 Wash ile yıkayınız.
Aspire edilen folikülleri petriye koyun ve yumurtaları hemen foliküllerden çıkarın. Dengelenmiş GM501 Wash veya GM501 Culture ile yıkayın ve denudasyon veya inseminasyona kadar dengelenmiş IVF veya ICSI plağına aktarın.
|
Taze Yumurtaların Denudasyon İçin Hazırlığı
|
|
Dört Kuyucuklu Petride Hazırlama
10 yumurta kadar, bir adet 4 kuyucuklu bir petriyi aşağıdaki şemada olduğu gibi 1. Kuyucuğa 400 μl GYNEMED Hyaluronidase, 2. 3. ve 4. kuyucuğa GM501 Wash medyum koyarak hazırlayınız.
Kuyucukları Gynemed GM501 Mineral Oil ile kaplayınız ve 37°C de % 5 – 7 CO2 li ortamda 4 saat inkübe ediniz.
|
60 mm’lik Petride Hazırlama
10 yumurtaya kadar, 60 mm’lik bir petriyi aşağıdaki şemada olduğu gibi 7 tane 80 μl lik HYA işlemi damlalarını hazırlayınız. Biri Hyaluronidase, diğerleri GM501 Wash damlalarıdır.
Bütün damlaları 9 – 10 μl Gynemed Mineral Oil ile kaplayın ve 37°C de, % 5 – 7 CO2’ li ortamda 4 saat inkübe ediniz.
|
Mikro Damlacıklar ile Denudasyon Prosedürü.
1- Stereo Mikroskop altında petrinin içindeki taze yumurtaları inkübatörden dışarı alınız.
2- Hazırlanan HYA işlemi petrisinin ortasına 10 kadar yumurtayı pipetleyin (50μl-100μl ayarlı). Eğer 10 dan fazla yumurta varsa kalanları inkübatöre geri koyunuz.
3- Yumurtalardan 5 tanesini GM501Hyaluronidase damlasının içine koyunuz.
4- Hemen yumurtaları GM501 Hyaluronidase içinde beş on defa pipet ile çekip bırakarak, dışarı alınız.
5- Bu işlem ile kümülüs hücrelerden ayrılacak ve corona hücreleri ile çevrili olan yumurta görünür olacaktır.
|
Not: Yumurtalar 30 saniyeden fazla Hyaluronidase solüsyonu içinde tutulmamalıdır.
|
6- Denuding pipeti (iç ölçüleri 135μm – 150μm) ile yumurtaları, sağındaki GM501 Wash içine taşıyınız.
7- Yumurtaları GM501 Wash içinde birkaç defa çekip bırakmak suretiyle yıkayınız.
8- Bütün yumurtaları bir sonraki GM501 Wash damlasına koyunuz ve aynı işlemi corona hücreleri çıkarılıncaya kadar tekrarlayınız.
9- Aynı işlemi, bir sonraki GM501 Wash damlasının içinde tekrarlayarak 4.GM501 Wash damlasına aktarınız.
10- Şimdi kalan diğer 5 yumurta için aynı işlemleri (4 -10) tekrarlayınız.
11- Bütün yumurtaları 4. damla içinde toplayıp, kümülüs ve corona hücrelerinden temizledikten sonra, onları son iki GM501 Wash damlaları içinde yıkayınız. Bu yumurtaları IVF veya ICSI işlemine kadar GM501 Culture içinde inkübe ediniz.